皮肤光老化动物模型(UVB诱导)
建模方法
小鼠在正常温度、湿度和光照(12小时光照/ 12小时黑暗,无紫外线照射)喂养。喂养一周,等小鼠适应了环境,用8%硫化钠在小鼠的背部剃出超过2厘米x3厘米的脱毛区。
紫外照射方法: UVB灯管(40W)安放至福照箱中作为紫外福照光源。利用紫外照度仪(UV-B紫外辐照计)测定UVB的辐射强度。造模前,UV灯管预热10 min,待光源稳定后将实验鼠放入自制的鼠笼内(使小鼠间不能相互攀爬、站立),并放入箱照箱内,鼠笼与UV灯管相距30 cm,根据预试所得最小红斑剂量(MED)及光源强度调节福照时间,照射期间用排气扇降低箱体温度。第1周按1个MED的剂量进行照射,每周照射3次,往后每周照射剂量比前周递增1个MED,直至第4周4个MED为止,之后保持4个MED直至第8周实验结束。模型组小鼠背部皮肤出现明显增厚、皱纹粗深、松弛等光老化皮肤表征,说明小鼠皮肤光老化造模成功。
MED测定方法:对预实验小鼠分别采用30mJ/cm2、60mJ/cm2、90mJ/cm2、120mJ/cm2、150mJ/cm2、180mJ/cm2的紫外福照剂量对其背部皮肤进行辐照,照射后24h观察小鼠背部皮肤出现肉眼可见红斑所需剂量为最小红斑剂量(MED)。
模型评价
1.全鼠背部拍照
于第4周以及第8周取样前,拍摄全鼠背部照片,以确定是否出现光老化特征(皱纹粗深、松弛等)。
2. 免疫指标: 脾脏和胸腺指标的测定
小鼠称重并执行颈椎脱位,并立即从小鼠中取出脾脏和胸腺,立即称重。胸腺和脾脏指数根据下述方程
计算:胸腺或脾脏指数(mg/g)=胸腺或脾脏重量/体重。
指数(TI)和脾指数(SI)可作为免疫指标。
3.组织学分析
在最终紫外照射后的24h内取皮肤标本进行组织化学研究。小鼠皮肤样品在4%缓冲中性福尔马林溶液中固定24h,并嵌入石蜡中,连续切片。