品系基本信息
特性和用途
T7 体外转录试剂盒
产品组成：
编号 | 组成 | VK010-30T |
1 | T7 RNA Polymerase Mix (5U/μL) | 300U |
2 | rNTP(100mM, rATP/rUTP/rCTP/rGTP) | 60μL |
3 | 10X Transcription Buffer | 60μL |
4 | Stop Solution | 500μL |
5 | DNaseI (2U/μL) | 60U |
6 | DEPC H2O | 1ml |
注意：收到试剂盒后，使用前请离心，避免试剂滞留在离心管盖上。
保存与运输：
产品于 -20℃ 保存，避免反复冻融；采用蓝冰运输。
说明：
T7 RNA 聚合酶对 T7 噬菌体启动子具有高度的特异性，以上游带有 T7 启动子的目的基因的线性化 DNA 为模板使用此试剂盒可体外快速将模板 DNA 转录成相应的 RNA.
T7 RNA 聚合酶启动子同源序列：
+1
T7(5’→3’) TAATACGACTCACTATAGGG
G(+1) 是 RNA 转录的起始位点，正义 RNA 合成要求将目标序列置于启动子的下游。
应用：
1/ CRISPR 系统中的 gRNA 转录，转录的 gRNA 可以快速进行体外准确剪切，或者显微注射。
2/ siRNA 的合成。
使用步骤：
一、转录模板 DNA 的准备
可以采用下面两种方式之一来准备体外转录模板 DNA:
1/ 线性化的质粒 DNA: 含有 T7 RNA 聚合酶启动子且方向正确，在目的基因下游切割使质粒 DNA 线性化；
2/ PCR 产物：T7 RNA 聚合酶启动子必须定位在目的基因的上游。
二、RNA 的体外转录
反应体系：
10x Transcription Buffer | 2μL |
rNTP (100mM) | 2μL |
T7 RNA Polymerase Mix | 2μL |
template DNA（≥100ng/μL） | 1μL |
DEPC H2O | up to 20μL |
以上混合后，37℃ 反应 1～2 小时。
反应结束后，加入 1 μL DNase I, 37℃ 反应 30 分钟。
三、RNA 的回收与提取：
1/ 加入 115μL DEPC 水，15μL Stop Solution 混匀后，加入 2 倍体积(300μL)的无水乙醇（自备），充分混匀后，-20℃ 冻存 30min 以上（若 RNA 小于 300nt, -20℃ 冻存 3 小时以上）。
2/ 13000rpm 4℃ 离心 20min, 去除上清保留沉淀。
3/ 加入 300μL 的 70％ 冷乙醇清洗（自备，注意用 DEPC 水配制），13000rpm 4℃ 离心 15min, 去除上清保留沉淀，待乙醇晾干后，加入 DEPC 水溶解 RNA 沉淀。
4/ 测量 RNA 浓度，直接用于后续实验，或者 -80℃ 保存待用。
注：以上的操作请全部购买和使用 RNase free 的枪头及 EP 管，ddH2O 用 DECP 处理。
验证数据
查看T7 体外转录试剂盒产品说明书
与唯尚立德一起，共同创造更多价值。
京公网安备 11011402010692号
