CRISPR/Cas9 载体构建服务
简介：
Clustered regularly interspaced short palindromic repeat (CRISPR)/Cas9是细菌和古细菌的一种不断进化适应的免疫防御机制。CRISPR/Cas9利用一段小 RNA 来识别并进行有效的靶向DNA剪切。
（来自Nature Biotech. 2012:30, 836–838）
服务内容：CAS9/gRNA质粒构建全套解决方案
步骤 | 服务内容 | 配套产品 |
明确物种和载体 | 不同物种不同载体，清单请详见:CRISPR/Cas9快速构建试剂盒 |
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设计靶点 | 一般在不同转录产物的共同外显子上设计3-5个靶点，靶点位置尽量在基因CDS的前1/3，ATG之后，不在最后一个exon上，最好能破坏重要的domain和所有的转录产物isoform。 |
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合成 | 合成前请检测靶点是否存在SNP | T7E1酶 |
靶点切割活性检测 | 293T细胞内检测SSA活性 | CAS9酶体外切割活性验证 | SSA活性报道质粒构建试剂盒、Cas9-gRNA靶点效率检测试剂盒、CAS9酶 |
内源活性验证（有条件选择） | 若目的细胞转染效率高，如293T细胞，可转染72h后提基因组，扩增靶序列，T7E1酶切验证，进一步测序验证。 | T7E1酶
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