Cas9 核酸内切酶 (Cas9 DNA endonuclease)

概述：

CRISPR/Cas 是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御，可特异剪切外源的病毒及 DNA 以对抗入侵。

人工改造过的 Cas9/gRNA 系统通过 gRNA(short guide RNA) 引导 Cas9 蛋白识别并剪切带有 gRNA 靶点的双链 DNA, 用于基因敲除和精确编辑 DNA 等操作。

来源：

重组 Cas9

应用：

1/ Cas9/gRNA 特异位点体外剪切 DNA, 如 plasmids, genomic DNA, PCR product

2/ 体外检测 gRNA 的剪切靶点 DNA 的效率

3/ Cas9 蛋白结构与功能研究

反应条件：

1×Buffer [20mM HEPES, pH 7.5, 150mM KCl, 10mM MgCl₂, 0.1mM EDTA, 0.5mM DTT], 37℃ 温育。

质保声明：

Cas9 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。请使用前务必仔细阅读本手册。

单位定义：

在 50μl 反应体系中，37℃, gRNA 足量时，1U 等于 1h 能将 1ug 质粒或线性 DNA 完全酶切所需的 Cas9 蛋白量。

注意事项：

1/ Cas9 切割 dsDNA 效率与 gRNA 靶点序列有关，每个 gRNA 的效率都会不同。

2/ 所用枪头管子等都必须是 RNase free 的，gRNA 可以适当多加，防止因为部分降解而降低酶切效率。

Cas9 体外酶切法检测 gRNA 靶点效率实验步骤：

1/ 带有 gRNA 靶点的质粒或 PCR 扩增出的 DNA 片段，gRNA 靶点最好不位于 PCR 片段中央，这样将切割出两条大小不同带便于判断。

2/ gRNA 靶点设计与体外转录准备见唯尚立德 cas9/gRNA 质粒构建试剂盒。

3/ 反应体系：

琼脂糖凝胶电泳检测分析酶切结果。

使用限制：本试剂仅限用于科学研究。

储存与安全：

本品 4℃ 运输，储存于 -20℃ 有效期 12 个月。长期储存请置于 -80℃.

本品采用蓝冰运输，蓝冰在使用前在 -80℃ 冷冻至少 72 小时。实验证明，使用上述方法运输，即使到货时蓝冰已经融化，泡沫塑料盒中的温度仍然能保持在 4℃ 或 4℃ 以下 24 小时。比较干冰运输的产品，其活性和稳定性无任何差异。

产品纯化整个过程都在 4℃ 进行，且其贮存液经过优化，对保持酶活的稳定性起到重要作用。产品中含有 50% 甘油，可以使酶在 -35℃ 下保持液态，若使用干冰运输，酶将被冷冻，发生反复冻融可能会导致酶活性下降。