T7 核酸内切酶 I (T7 endonuclease I, T7E1 )

应用
■ 基因突变和SNP的检测，可应用于TALEN、CRISPR/CAS9形成的突变体检测
■ 识别错配 DNA，分解四方向交叉 DNA 或分支 DNA
■  检测或切割异源二聚体 DNA 和切割 DNA
■  随机切割线性 DNA 进行 shot-gun 克隆

概述
T7 核酸内切酶 I 识别并切割不完全配对 DNA、十字型结构 DNA、Holliday 结构或交叉 DNA、异源双链DNA 或者以更慢的速度切割或切刻双链 DNA。该酶切割错配碱基 5′ 端的第一、第二或第三个磷酸二酯键。

来源
重组T7 核酸内切酶 I (T7 endonuclease I, T7E1 )

反应条件
Buffer [50 mMNaCl，10 mMTris-HCl，10 mM MgCl2，1 mM DTT（pH 7.9 @ 25℃）], 即同1X NEBuffer 2，37℃温育。

质保声明
T7 核酸内切酶 I 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。请使用前务必仔细阅读本手册。

单位定义
1 单位指在50 μl反应体系，37℃，1 小时将1 μg超螺旋十字型结构的pUC（AT）质粒酶切成 90% 以上的线性DNA所需要的酶量。

注意事项
T7 核酸内切酶 I 是一种具有底物结构选择性的酶。该酶以不同的活性作用于不同的 DNA 底物。切割特定底物时，必须控制酶量和反应时间。反应温度超过 42℃时，会增加非特异性核酸酶活性。避免反应温度超过55℃，会导致酶活性降低。
T7E1酶切法检测突变体实验步骤
1、PCR扩增出带有突变位点(如TALEN or CRISPR/Cas9的target site) DNA片段，长度约500bp，突变位点最好不位于PCR片段中央，这样将切割出两条大小不同的带。
2、突变体DNA与野生型DNA的PCR产物按如下体系进行混合，进行加热变性、退火复性处理。

3、建议退火程序：（PCR仪）
        95℃ 5 min
        95℃ 2 sec
        -0.1℃/cycle, 200 times    
        75℃ 1 sec
        -0.1℃/cycle, 600 times
        16℃ 2 min
4、上述反应体系退火后分别加入0.5μl T7E1酶，37℃反应30 min后，立刻跑2%的琼脂糖凝胶电泳检测分析酶切结果。（放置时间过长可能会导致PCR产物全部降解。）

阳性参照

阳性参照是一个碱基的点突变检测。
使用本试剂盒提供阳性参照引物的混合物：
Control-GC-F    ACACCTGATCAAGCCTGTTC
Control-GC-R    CGCCAAAGAATGATCTGCG
分别以阳性DNA Control C和Control G为模板，PCR扩增出600bp的阳性DNA片段，点突变标示如下：

阳性参照可以分别单独PCR扩增后， PCR产物等量混合，或者混合DNA模板进行PCR扩增，PCR产物进行加热变性、退火复性处理后，用T7E1酶切，产生400bp+200bp两个端片段。

使用限制
本试剂仅限用于科学研究。

储存与安全
本品4℃运输，储存于-20℃，有效期12个月。长期储存请置于-80℃。
本品采用蓝冰运输，蓝冰在使用前在-80℃冷冻至少72小时。实验证明，使用上述方法运输，即使到货时蓝冰已经融化，泡沫塑料盒中的温度仍然能保持在4℃或4℃以下24小时。比较干冰运输的产品，其活性和稳定性无任何差异。产品纯化整个过程都在4℃进行，且其贮存液经过优化，对保持酶活的稳定性起到重要作用。产品中含有50%甘油，可以使酶在-35℃下保持液态，若使用干冰运输，酶将被冷冻，发生反复冻融可能会导致酶