RNA是以DNA的一条链为模板，以碱基互补配对原则，转录而形成的一条单链，主要功能是实现遗传信息在蛋白质上的表达，是遗传信息传递过程中的桥梁。mRNA是基因(DNA)转录后的产物,有基因(DNA)不一定能转录,相同的基因在不同的状况下转录得到mRNA的量也不一样。所以检测mRNA,可以在一定程度上反应该基因的表达情况。
RNA的提取便是我们研究基因表达和调控的第一步，也是非常关键的一步。得到高质量的RNA对于后续很多实验的结果十分重要，例如RT-qPCR、实时荧光定量PCR、northernblot等。目前最常用的RNA提取方法是Trizol法，Trizol 试剂是由苯酚和异硫氰酸胍配制而成的快速抽提总RNA的试剂。在匀浆和裂解样品的过程中，Trizol 试剂能够保持RNA的完整性，同时能破碎细胞、降解细胞其它成分。在氯仿抽提、离心分离后，RNA处于水相中，将水相转管后用异丙醇沉淀RNA。将组织在液氮中磨碎，每50-100mg组织加入1ml TRIzol，用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10%。如果是培养细胞，则直接在培养皿中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。将样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸-蛋白复合物完全分离。1 ml Trizol加入200ul预冷的氯仿，上下振荡15s，室温孵育5min。4℃，12000 g，离心15 min。分离得到三层，下层红色的酚-氯仿相、中间相以及上层无色水相，RNA存在于水相。
转移约400~500ul水相至新的离心管，加入等体积预冷的异丙醇，上下轻慢的混匀，室温静置10分钟后，4℃，12000g离心10min，弃上清。加入1ml预冷的75%乙醇，轻轻将整块沉淀吹起悬浮， 4℃，7500 g，离心5 min。此时，试管底部可见少量白色沉淀，尽量吸尽上清，室温干燥3-5min，待沉淀周围无明显残留液体时，视沉淀大小加入30-50ul RNase free水，充分溶解沉淀，保存于-80℃。以无RNase水作空白对照，测OD260/280值。1 OD=40μg RNA。OD260/280值在1.8-2.0视为纯度很高。一般浓度在1000ng/ml较准。浓度太高要稀释以后再测定。甲醛变性琼脂糖电泳，确定抽提RNA完整性和DNA污染情况。若RNA质量较好，可见18S和28S两条明显的RNA条带，且28S条带亮度更高，最理想的是28S亮度为18S的2倍。
1.最好使用新鲜组织，或者-80℃（液氮）保存半年内的组织，避免RNA降解影响RNA提取的效果。2.提取过程尽量在冰上操作，低温离心，防止在操作过程中RNA降解。3.所用器材均需经过DEPC浸泡，高压灭菌后才能使用，所有试剂均需保证无RNA酶污染。4.在吸取水相时需注意少吸、轻吸，不能吸到中间相，避免中间相中的蛋白和基因组DNA造成污染和RNA降解。
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