CN EN
您当前所在的位置: 网站首页 >> >我们的业务 >> 基因编辑试剂盒 >> T7 体外转录试剂盒

T7 体外转录试剂盒


货号       

规格

价格

#VK010

30次

1288元

产品组成:

编号

组成

VK010-30T

1

T7 RNA Polymerase Mix (5U/μL)

300U

2

rNTP(100 mM,rATP/rUTP/rCTP/rGTP)

60μL

3

10X Transcription Buffer

60μL

4

Stop Solution

500μL

5

DNaseI (2U/μL)

60U

6

DEPC H2O

1ml

注意: 收到试剂盒后,使用前请离心,避免试剂滞留在离心管盖上。

保存与运输
    产品于-20℃保存,避免反复冻融;采用蓝冰运输。

说明
    T7 RNA 聚合酶对T7噬菌体启动子具有高度的特异性,以上游带有T7启动子的目的基因的线性化DNA为模板体外快速转录成相应的RNA。 T7 RNA 聚合酶启动子同源序列:

                                                                                       +1
                          T7(5’→3’)TAATACGACTCACTATAGGG  
          G(+1)是RNA转录的起始位点,正义RNA合成要求目标序列置于启动子的下游。


应用
    1. CRISPR系统中的gRNA转录,转录的gRNA可以快速进行体外准确剪切,或者显微注射。
    2. siRNA的合成。

使用步骤
一、转录模板DNA的准备
    可以采用下面两种方式之一来准备体外转录模板DNA:
    1、线性化的质粒DNA:含有T7 RNA聚合酶启动子且方向正确,在目的基因下游切割使质粒DNA线性化;
    2、PCR产物:T7 RNA聚合酶启动子必须定位在目的基因的上游。
二、RNA的体外转录
    反应体系:

10xTranscription Buffer

2 μL

rNTP (100 mM)

2 μL

T7 RNA Polymerase Mix

2 μL

template DNA(≥100ng/μL)

1μL

DEPC H2O

up to 20 μL

以上混合后,37℃反应1~2小时。
反应结束后,加入1 μL DNase I,37℃反应30分钟。


三、RNA的回收与提取:
1、加入115μL DEPC水,15μL Stop Solution混匀后,加入2倍体积(300μL)的无水乙醇(自备),充分混匀后,-20℃冻存30min以上(若RNA小于300nt,  -20℃冻存3小时以上)。
 2、13000rpm 4℃离心20 min,去除上清保留沉淀。
3、加入300μL的70%冷乙醇清洗(自备,注意用DEPC水配制),13000rpm 4℃离心15 min,去除上清保留沉淀,待乙醇晾干后,加入DEPC水溶解RNA沉淀。
4、测量RNA浓度,直接用于后续实验, 或者-80℃保存待用。


注:以上的操作请全部购买和使用RNase free 的枪头及EP 管,ddH2O用DECP处理。