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Cas9-gRNA 靶点效率检测试剂盒

原理:

       CRISPR/Cas9是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御,可特异剪切外源的病毒及DNA以对抗入侵。 人工改造过的Cas9/gRNA系统通过gRNA(short guide RNA)引导Cas9蛋白识别并剪切带有gRNA靶点的双链DNA,用于基因敲除和精确编辑DNA等操作。利用CRISPR技术进行基因敲除和编辑操作实验前,获得剪切活性高的gRNA靶点是实验成功的关键。Cas9/gRNA剪切活性与gRNA靶点的识别序列有关,每个gRNA的剪切活性都会不同。
       本方法通过spCas9/gRNA体外酶切靶点DNA片段,进行gRNA靶点活性的评估。体外spCas9酶切DNA效果与DNA浓度、spCas9酶量、反应时间、gRNA的量、靶点活性有关,为了科学地评价gRNA靶点效率,将固定DNA浓度和spCas9酶量,在一定单位时间内,测量spCas9酶切靶点DNA的效率,并通过与已知有活性的gRNA靶点进行比较,评价目标gRNA靶点的活性。


产品组成


组成货号VK007-10TVK0107-30T
Csa9酶切试剂Cas9(1U/μL)VK007-1012μL34μL
10×saCas9 bufferVK007-1150μL200μL
外体转录试剂T7RNA Polymerase Mix(5U/μL)VK007-1222μL62μL
rNTP(100mM,rATP/rUTP/rCTP/rGTP)VK007-1324μL64μL
10×Transcription BufferVK007-1424μL64μL
Stop SolutionVK007-15200μL500μL
DNasel(1U/μL)VK007-1624μL64μL
标准gRNA

标准gRNA模板(50ng/μLVK007-1720μL60μL
标准gRNA1(g1)引物g1-FP(10μM)VK007-1810μL30μL
标准gRNA2(g2)引物g2-FP(10μMVK007-1910μL30μL
反向引物gRNA-RP(10μM)VK007-2030μL100μL
DEPC H2OVK007-211mL1mL

注意: 收到试剂盒后,使用前请离心,避免试剂滞留在离心管盖上。


保存条件: 请将产品于-20℃保存,避免反复冻融 

spCas9-gRNA 靶点效率检测试剂盒(Catalog. No. VK007).pdf